眼科手術(shù)顯微鏡的發(fā)展需要創(chuàng)新精神

 　　眼科手術(shù)顯微鏡作為奧林巴斯顯微鏡的一種類型，是*，從80年代末期才開始發(fā)展的。
 
　　眼科手術(shù)顯微鏡的原理是利用激光掃描束通過光柵針孔形成點光源，在熒光標(biāo)記標(biāo)本的焦平面上逐點掃描，采集點的光信號通過探測針孔到達(dá)光電倍增管（PMT），再經(jīng)過信號處理，在計算機監(jiān)視屏上形成圖像。
 
　　對于物鏡焦平面的焦點處發(fā)出的光在針孔處可以得到很好的會聚，可以全部通過針孔被探測器接收。而在焦平面上下位置發(fā)出的光在針孔處會產(chǎn)生直徑很大的光斑，對比針孔的直徑大小，則只有極少部分的光可以透過針孔被探測器接收。
 
　　而且隨著距離物鏡焦平面的距離越大，樣品所產(chǎn)生的雜散光在針孔處的彌散斑就越大，能透過針孔的能量就越少，因而在探測器上產(chǎn)生的信號就越小，影響也越小。正由于共焦顯微僅對樣本焦平面成像，有效的避免了衍射光和和散射光的干擾，使得它具有比普通顯微鏡更高的分辨率，并在生物學(xué)中獲得了廣泛的應(yīng)用。
 
　　激光共焦顯微鏡使用方便，與一般光學(xué)顯微鏡相似，且全部采用計算機直觀控制。基本無須制樣，不損傷樣品。不需要做導(dǎo)電處理，也容許大尺寸樣品直接觀察，*不破壞樣品。幾十秒到一兩分鐘即完成全部的掃描，成像，測量采樣工作。
 
　　眼科手術(shù)顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場光源和局部平面成像模式，采用激光束作光源，激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標(biāo)本焦平面上每一點進行掃描。
 
　　組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì)，受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測針孔時先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管（PMT）探測收集，并將信號輸送到計算機，處理后在計算機顯示器上顯示圖像。在這個光路中，只有在焦平面的光才能穿過探測針孔，焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測小孔平面是離焦的，不能通過小孔。
 
　　因此，非觀察點的背景呈黑色，反差增加，成像清晰。由于照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦于照明針孔與探測針孔，焦平面以外的點不會在探測針孔處成像，即共聚焦。以激光作光源并對樣品進行掃描，在此過程中兩次聚焦，故稱為激光掃描共聚焦顯微鏡。
 
　　奧林巴斯激光共焦顯微鏡從產(chǎn)生至今不斷的追求發(fā)展，顯微鏡的光源設(shè)計和分光采集技術(shù)也有較大的改進，主要集中在如下幾個方面：
 
　　現(xiàn)代的眼科手術(shù)顯微鏡可以根據(jù)研究需要選擇不同的激光器。選擇激光光源時，一方面要滿足研究工作對波長的需求，另一個方面要考慮到激光光源的壽命。一代激光共焦顯微鏡可以用棱鏡狹縫分光的新技術(shù)，配上合適的激光源后，能夠擺脫傳統(tǒng)的波長濾片組的限制，連續(xù)和自由地選擇波長。顯微鏡的物鏡也做了較大的改進，不但具有平場復(fù)消色差特性，而且能與高速掃描功能相匹配。